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细胞transwell实验(transwell细胞迁移实验)

导读 大家好,今天小六子来为大家解答以下的问题,关于细胞transwell实验,transwell细胞迁移实验这个很多人还不知道,现在让我们一起来看看吧!1

大家好,今天小六子来为大家解答以下的问题,关于细胞transwell实验,transwell细胞迁移实验这个很多人还不知道,现在让我们一起来看看吧!

1、Transwell法的步骤:先把小室擦干净后在超净工作台照紫外过夜。

2、如新的小室省略此步。

3、下一步将小室倒扣并小室的底部外侧滴加0.1%(还是1%记不清了)的明胶室温放置20-30分钟。

4、这是将细胞消化下来,调浓度。

5、拿出24孔板加600ml的含有刺激因子的培养基。

6、小室上还未干的明胶甩掉,加细胞放入24孔板里。

7、放入细胞培养箱培养4-6小室。

8、拿出小室甩掉里边的培养基。

9、小心擦尽小室里边的细胞(不能碰外边)。

10、将小室放入装有600ml结晶紫的24孔板染色1小时。

11、移到空的24孔板后即可在显微镜下观察了。

12、细胞迁移实验步骤(Neuroprobe的使用方法) 1.膜预处理将48.5ml H2O +1.5ml 醋酸+150μL 鼠尾胶原置于50ml的离心管。

13、在膜的粗糙面用铅笔做标记,放入上述溶液中4度过夜。

14、实验前将膜取出,放入装有PBS的培养皿中漂洗一遍,再用饥饿培养基洗一遍,吸去培养基后加入新的饥饿培养基,放入37度培养箱中。

15、2. 处理细胞将细胞消化,调浓度1×105个/ml,细胞迁移装置下层加入166μl含有刺激因子的饥饿培养基。

16、小心铺好膜(粗面朝下),装好塑料垫,固定上层装置。

17、上层加入100μl细胞悬液,迁移4-6h。

18、3. 固定小心将膜取下来,在用PBS弄湿的滤纸上挂掉光滑面的细胞,在新的滤纸上粗面朝上放置,彻底晾干。

19、然后再甲醇里粗面朝上固定5min,彻底晾干。

20、4. 染色粗面朝下置于结晶紫染液中30min,取出膜用双蒸水漂洗一遍,粗面朝上放在载玻片上,数细胞。

21、这个方法比transwell方便。

22、与boyden chemper法类似。

本文分享完毕,希望对你有所帮助。

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